1. Raġunijiet għall-preċipitazzjoni fil-garafini tal-kultura taċ-ċelluli: temperatura
Il-kultura taċ-ċelluli tirreferi għal metodu ta 'simulazzjoni ta' l-ambjent in vivo in vitro, sabiex iċ-ċelloli jkunu jistgħu jgħixu, jikbru, jirriproduċu u jżommu l-istruttura u l-funzjoni prinċipali. Il-garafini tal-kultura taċ-ċelluli huma tip ta 'konsumabbli taċ-ċelluli użati komunement fil-kultura taċ-ċelluli aderenti. Matul il-kultura taċ-ċelluli, ħafna drabi nsibu li xi impuritajiet jakkumulaw fil-likwidu. Hemm ħafna raġunijiet għal dan, u t-temperatura hija wkoll waħda mir-raġunijiet komuni.
Il-preċipitazzjoni fil-garafini tal-kultura taċ-ċelluli tista' tkun kontaminazzjoni taċ-ċelloli. Jekk il-kontaminazzjoni hija eskluża, it-turbidità fil-mezz tal-kultura taċ-ċelluli ġeneralment tiġi interpretata bħala preċipitazzjoni ta 'elementi tal-metall, proteini, u komponenti medji oħra. Il-preċipitati jfixklu l-aktar il-proliferazzjoni normali taċ-ċelluli minħabba li jassorbu n-nutrijenti u komponenti oħra meħtieġa tal-medju permezz ta 'kelazzjoni, u b'hekk ibiddlu l-kompożizzjoni tal-medju. Il-preċipitati huma mikroskopikament viżibbli u jistgħu jinterferixxu ma 'esperimenti li jeħtieġu analiżi ta' immaġini.
Fil-kultura taċ-ċelluli, it-temperatura hija waħda mill-fatturi ewlenin li jikkawżaw il-preċipitazzjoni. Proteini tal-plażma ta 'piż molekulari għoli jistgħu jippreċipitaw mis-soluzzjoni meta jkunu soġġetti għal bidliet estremi fit-temperatura; inattivazzjoni tas-sħana u ċikli ta 'friża-tidwib jistgħu jippromwovu d-degradazzjoni u l-preċipitazzjoni tal-proteini; peress li l-midja likwida jew rikostitwita tinżamm refriġerata bejn l-użi, il-melħ jista 'jippreċipita, speċjalment 10x jew soluzzjonijiet oħra ta' stokk ikkonċentrat.
Naturalment, jekk isseħħ preċipitazzjoni fil-garafina tal-kultura taċ-ċelluli, jekk jiġi determinat li hija kkawżata mit-temperatura, huwa meħtieġ li tingħata attenzjoni lill-ambjent tal-ħażna u l-metodu ta 'tħaddim tal-medju, u tevita l-iffriżar u t-tidwib ripetuti, li jistgħu jnaqqsu il-probabbiltà ta' preċipitazzjoni.
2. Il-kawża tal-preċipitazzjoni fil-garafina tal-kultura taċ-ċelluli: supplimenti tal-metall
Il-joni tal-metall bħar-ram, il-ħadid u ż-żingu huma meħtieġa għat-tkabbir taċ-ċelluli u huma supplimenti importanti għall-midja ħielsa mis-serum. In-nuqqas ta 'komponenti oħra tas-serum fis-sistema tal-kultura jista' jwassal għall-preċipitazzjoni ta 'dawn il-metalli, u joħloq ambjent tossiku għaċ-ċelloli. F'ambjent ta 'pH ogħla (ġeneralment> 8), joni karbonat u idrossidu u joni tar-ram, joni fosfat u idrossidu u jonji tal-ħadid, joni karbonat, fosfat u idrossidu u joni taż-żingu, joni idrossidu u joni tal-manjeżju għandhom it-tendenza li jiffurmaw preċipitati li ma jinħallux; taħt kundizzjonijiet ossidanti, ir-ram u ż-żingu huma aktar probabbli li jippreċipitaw, li huwa dak li naraw fil-garafini tal-kultura taċ-ċelluli.
Allura kif nevitaw il-preċipitazzjoni kkawżata minn supplimenti tal-metall? Nistgħu nżidu transferrin tal-proteina li torbot il-ħadid, jew inżidu buffer biex nevitaw bidliet fil-pressjoni osmotika. Nistgħu wkoll inżidu mannitol jew pyruvate mal-mezz biex torbot il-perossidazzjoni. Idroġenu biex jimminimizza l-istress ossidattiv.
Fi ftit kliem, tinħoloqx paniku meta jkun hemm preċipitazzjoni fil-garafina tal-kultura taċ-ċelluli. Analiżi speċifika biex issir taf ir-raġuni u l-formulazzjoni ta 'miżuri korrispondenti tista' tnaqqas ħafna l-okkorrenza ta 'preċipitazzjoni u tiżgura t-tkabbir tajjeb taċ-ċelloli.
Id-daqs tat-tubu tad-demm, id-daqs tat-tubu tat-test tad-demm, l-istand tal-ponta tal-pipetta, l-aħjar manifattur tal-ponot tal-pipetta