Il-metodi ewlenin għall-identifikazzjoni tal-fosforilazzjoni huma kif ġej: a. Analiżi ta 'fosforilazzjoni in vitro: Reazzjonijiet ta' kinażi radjometriċi li jużaw 32P-gamma-ATP jistgħu jintużaw biex jindividwaw status ta 'fosforilazzjoni in vitro; dan il-metodu huwa semi-kwantitattiv, iżda jista 'jiddetermina l-piż molekulari ta' proteini fosforilati. b. Tikkettar tal-polz radjuattiv: Biex tiskopri fosforilazzjoni in vivo, jista 'jintuża tikkettjar tal-polz radjuattiv; ċelluli huma mkabbra fil-preżenza ta '32P-ortofosfat, u mbagħad ċerta proteina hija immunoprecipitata b'antikorp speċifiku. Ir-radjuisotopi miksub permezz tal-preċipitazzjoni huwa analizzat bl-elettroforeżi SDS-PAGE u kkwantifikat bl-espożizzjoni tal-film tar-raġġi-X. Dan il-metodu jista 'jiskopri fosforilazzjoni taħt diversi kundizzjonijiet fiżjoloġiċi. c. Antikorpi speċifiċi għall-fosforilazzjoni: Hemm żewġ kategoriji ta 'antikorpi speċifiċi għall-fosforilazzjoni. L-ewwel kategorija hija antikorp tyrosine/serine/threonine ta 'fosforilazzjoni universali li se jorbot ma' kwalunkwe tyrosine fosforilata, serine fosforilata u molekula ta 'treonina fosforilata, irrispettivament mir-residwi ta' amino aċidi maġenb; it-tieni kategorija ta 'antikorpi hija antikorp tal-epitopi tal-aċidu amminiku speċifiku għall-fosforilazzjoni. Naturalment, il-metodi ta 'hawn fuq jistgħu jiġu kkombinati mal-mod ta' akkwist tad-dejta jew wara spettrometrija tal-massa biex jiġu identifikati siti (putattivi) ta 'fosforilazzjoni, uża antikorpi universali għal siti ta' fosforilazzjoni biex tiddetermina jekk il-proteina fil-mira hijiex fosforilata f'tip speċifiku ta 'sit permezz ta' immunopreċipitazzjoni (IP) .
Analiżi ta 'glycosylation tista' ssir b'diġestjoni enżimatika (bħal diġestjoni trypsin) tal-proteina li għandha tiġi analizzata, segwita minn analiżi ta 'glycopeptides bl-użu ta' kromatografija likwida-spettrometrija tal-massa (LC-MS) jew kromatografija ta' interazzjoni idrofilika-spettrometrija tal-massa tandem (HILIC-MS/ MS) biex tidentifika l-proteini kollha b'molekuli speċifiċi ta 'glycan, jew is-siti ta' rbit ta 'glycan fil-proteina fil-mira. Barra minn hekk, għal xi glycopeptides, l-analiżi tal-ispettrometrija tal-massa (MS) ta 'proteini intatti tista' tipprovdi dejta dwar l-identifikazzjoni tal-ispeċi tal-proteini u l-istatus ta 'glycosylation tagħhom, iżda b'riżoluzzjoni aktar baxxa.
Fil-qosor, għalkemm il-metodi għall-identifikazzjoni tal-fosforilazzjoni u l-glikosilazzjoni tal-proteini huma differenti, it-tnejn jistgħu jiġu analizzati bl-użu ta 'spettrometrija tal-massa, inkluża l-identifikazzjoni ta' proteini fosforilati/glikosilati, siti ta 'modifika ta' fosforilazzjoni/glikosilazzjoni, u livelli ta 'modifika. L-ispettrometrija tal-massa saret ukoll waħda mit-teknoloġiji tar-riċerka tal-modifika wara t-traduzzjoni l-aktar popolari minħabba r-riżoluzzjoni, l-eżattezza u s-sensittività superjuri tagħha.