Il-metodu ta 'evalwazzjoni tal-kopertura ta' l-antikorpi HCP ġeneralment jadotta taħlita ta 'elettroforeżi bidimensjonali (2-DE) u teknoloġija ta' immunoblotting tal-proteini (Western Blot), jiġifieri 2D-Western Blot. Bħalissa, l-elettroforeżi bidimensjonali tal-ġell tad-differenza tal-fluworexxenza (2D-DIGE) f'2D-Western Blot tintuża komunement biex tiskopri u tanalizza l-kopertura tal-antikorpi HCP fuq ġel tal-elettroforeżi bidimensjonali bl-użu ta 'tikketti fluworexxenti differenti u metodi ta' żvilupp tal-kulur fluworexxenti. Dan tejjeb l-eżattezza tal-evalwazzjoni sa ċertu punt, u jiffranka l-ħin u l-ispejjeż tar-reaġent. Madankollu, it-teknoloġija bbażata fuq l-elettroforeżi tiddependi fuq riżultati ta 'elettroforeżi ta' kwalità għolja, teħtieġ tikek ċari ta 'proteini mtebbgħin, u għandha impatt qawwi fuq il-ġudizzju tal-bniedem waqt l-analiżi tar-riżultat, li faċilment jista' jwassal għal riżultati mhux affidabbli.
Ħafna protokolli f'dan l-istadju jużaw metodi 2D-Western Blot (bħal 2D-DIGE) għall-iskoperta tal-kopertura u jqabblu l-iskoperta tal-antikorpi HCP ma 'tbajja' totali tal-proteini fil-ġell. Dan it-tip ta 'analiżi ta' kopertura jippermettilek li tagħmel stima tal-perċentwal ta 'kopertura u tista' tiggwidak biex tuża ELISA aktar speċifika jew analiżi ortogonali (bħal spettrometrija tal-massa). Is-sostituzzjoni tal-metodu 2-DE b'metodu ta' spettrometrija tal-massa b'riżoluzzjoni għolja tista' tidentifika b'mod preċiż it-tipi u l-abbundanza relattiva ta' proteini li jinsabu fil-kampjun HCP. Flimkien mat-tipi ta 'proteini li jistgħu jiġu rikonoxxuti minn antikorpi poliklonali HCP, kalkoli ta' tqabbil jistgħu jiksbu kopertura aktar realistika. L-ispettrometrija tal-massa tista' tkompli tidentifika b'mod kwalitattiv u kwantitattiv il-proteini HCP rikonoxxuti mill-antikorpi poliklonali HCP.